مرحله 1: پپتید خام ملانوتان I را در 100 میلی لیتر آب تصفیه شده حل کنید و مخلوط را از طریق یک غشای 0.45 میکرومتر فیلتر کنید تا یک محلول پپتیدی خام به دست آید.
مرحله 2: پپتید ملانوتان I خام را با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) خالص کنید. از یک ستون فشرده سازی محوری دینامیک DAC-HB50 با فرآیند شستشوی گرادیان، با استفاده از فاز متحرک A (0.05 درصد وزنی اسید تری فلورواستیک در آب) و فاز متحرک B (0.05 درصد وزنی تری فلورواستیک اسید در استونیتریل) استفاده کنید. نمونه را با استفاده از یک آشکارساز UV نظارت کنید و محلول پپتیدی مربوط به پیک هدف را در بخش جمع آوری کنید.
مرحله 3: پس از خالص سازی HPLC، 180 میلی لیتر محلول تری فلوئورواستات ملانوتان I با خلوص بیش از 99 درصد بدست آورید. این را از طریق تبخیر چرخشی تغلیظ کنید تا 50 میلی لیتر محلول به دست آید.
Step 4: Equilibrate the chromatography column with deionized water and load the sample (50 mL of the Melanotan I trifluoroacetate solution with >خلوص 99 درصد). با استفاده از سیستم اسید استیک آبی 2% به مدت 50 دقیقه شستشو دهید. محصول هدف جمع‌آوری‌شده را از طریق تبخیر چرخشی تا 80 میلی‌لیتر تغلیظ کنید، سپس آن را تحت فرآیندهای قبل{6} لیوفیلیزاسیون و لیوفیلیزاسیون قرار دهید. در نهایت، 5.33 گرم از پپتید ملانوتان I با خلوص بالا به دست آورید که نشان دهنده عملکرد 32.33٪ است.